泡菜汙廢水(shuǐ)處理
- 高鹽廢水是(shì)指鹽度(以 NaCl計)至少為10%(質量分(fèn)數)的廢水,主要包(bāo)括含鹽工業廢水、含鹽生活汙水和其他含鹽廢水。四川(chuān)泡菜是具有地(dì)方特色的發(fā)酵蔬菜(cài)製品(pǐn),泡製泡菜後的(de)高鹽廢水通常鹽度達到5.0%左右(yòu),其中含有大量的嗜(shì)鹽菌。
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高(gāo)鹽(yán)廢水是指鹽度(以 NaCl計)至少為10%(質量分數)的廢水,主要包括含鹽工業廢水、含(hán)鹽生活汙水和其(qí)他(tā)含鹽廢水。四川泡菜是具(jù)有地方特色的發酵蔬(shū)菜製品(pǐn),泡製泡菜後的高(gāo)鹽廢水通(tōng)常鹽度達到5.0%左右,其中含有大量的嗜鹽菌(jun1)。由於(yú)嗜鹽(yán)菌具有特殊的結(jié)構和理化性質,能抵抗高鹽濃度環境脅迫,不易(yì)汙(wū)染,可減少發酵工藝,降低成(chéng)本,因此常用於(yú)發酵生產。嗜(shì)鹽菌種類繁多,它們的分類主要依據三個方麵:表型特征、化(huà)學分類數據(jù)和分子生物學數據。
嗜鹽菌的分離(lí)和菌體的培養
將冷凍保藏的高鹽廢水置於培養箱中解凍活化,取0.1mL到EP管中,再(zài)加入0.9mL已滅菌的蒸餾水,用漩渦振蕩(dàng)器混合均勻。從中(zhōng)取200μL均勻塗布於LB培(péi)養基(其中 NaCl濃度為15% )上,37℃倒置培養48h。從(cóng)長出的菌中挑選(xuǎn)20株長勢較好的菌株轉接到新的LB培養基上,並對(duì)每一株菌進行編號。
再對每株菌進行反複劃線,直到得到單菌落。後將分離(lí)得到的菌劃線(xiàn)於(yú)保藏管中保藏待用。配製液體LB培養基300mL,分別置於3個(gè)三角瓶中,選取3株長勢較好(hǎo),差異較大的菌分別接種於3個三角瓶中,並作好標記,於37℃,200r/min搖床培養,17h 。
16SrDNA序列及係統發育分析
基因組DNA的提取和(hé)16SrDNA的擴增及序列分析參(cān)見Toru Shigematsu等(děng)方法。引物采用細菌16SrDNA PCR 擴 增 通 用 引 物 Eu27F ( 5′ - AGAGTTTGATCCTGGCTCAG - 3′ , 10 μ M )和原核微生物特異引物(wù) 1490R(5′ - GGTTACCTTGT TACGACTT - 3′ , 10 μ M )。PCR擴增條件:94℃ 變(biàn)性 1min , 50℃ 退火 1.5min , 72℃ 延伸2min , 30 個循環。 PCR 產物(wù)經 pGEM - T 載體 T - A 克隆入 E . coli DH 5α ,挑選陽性菌(jun1)落,提取重(chóng)組質粒。將質粒送 invitrogen 公司進行序(xù)列測定,並將測得的序列去載體後提交到(dào) NCBI進行比對,將所測(cè)序結果與數據庫中已知序列在GenBank 數據庫中比對,獲得(dé)與(yǔ)實驗菌株相似的典型(xíng)菌株 16SrDNA 序列,選取序列用 Clustal X 和MEGE 4.0繪製係統(tǒng)發育樹,對所構建的係統發(fā)育樹評估。
三、結果
1.嗜鹽菌(jun1)的分離結果
劃線(xiàn)分(fèn)離後得到的單菌落和終分離得到的20株單菌。由圖1,圖2可知,分離得到(dào)的(de)這20株單菌株有一定的耐鹽性(xìng),能在含鹽量為15%的 LB培養基上生長;嗜鹽菌菌落部分為白色,部分為黃色,扁平(píng),表(biǎo)麵光滑,濕潤,直(zhí)徑在1~2mm 左右。挑選(xuǎn)出差別較大菌株分別命名為 MS1 、 MS2 、 MS3 。
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